Önümler
2019-nCoV üçin Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR kesgitleýiş toplumy
Garaşylýan ulanyş
Bu toplum täze koronawirusy (2019-nCoV) bokurdak çişleri, nazofargeal çişler, bronhoalveolar lavaage suwuklygy, tüýkülik bilen hil taýdan kesgitlemek üçin ulanylýar. Bu önümiň ýüze çykarylyşy diňe kliniki salgylanma üçin ulanylýar we ýeke-täk hökmünde ulanylmaly däldir kliniki diagnoz we bejerginiň subutnamasy. theagdaýy giňişleýin seljermek hassanyň kliniki görnüşleri we beýleki laboratoriýa synaglary bilen bilelikde maslahat berilýär.
Barlag ýörelgesi
Kitap bir basgançakly RT- PCR tehnologiýasyna esaslanýar.Aslynda, güýçlendirmek maksatly sebitler hökmünde 2019-njy ýylyň täze koronawirusy (2019-nCoV) ORF1ab we N genleri saýlandy.Primörite primerler we floresan zondlar (N gen zondlary FAM bilen bellik edilýär we ORF1ab zondlary HEX bilen bellik edilýär) 2019-njy ýylda täze görnüşli koronawirus RNK nusgalarynda ýüze çykarylýar.Şeýle hem toplum, nusga ýygnamak, RNK we PCR güýçlendirmek prosesine gözegçilik etmek üçin endogen içerki gözegçilik kesgitleýiş ulgamyny (CY5 bilen bellik edilen içki gen geni) öz içine alýar we şeýlelik bilen ýalan negatiw netijeleri azaldýar.
Esasy komponentler
| Komponentler | Ses（48T / Kit） |
| RT-PCR reaksiýa çözgüdi | 96µl |
| nCOV primeri TaqMan probemixture （ORF1ab, N Gen, RnaseP Gen） | 864µl |
| Ativearamaz gözegçilik | 1500µl |
| nCOV Oňyn gapma-garşylyk OR l ORF1ab N Gen） | 1500µl |
Öz reagentleri: RNK çykarmak ýa-da arassalamak reagentleri.Ativearamaz / polo positiveitel gözegçilik: Oňyn gözegçilik maksatly bölegi öz içine alýan RNK, negatiw gözegçilik nuklein kislotasyz suw.Ulanylanda, gazyp almaga gatnaşmalydyrlar we ýokanç hasaplanmalydyrlar.Olara degişli düzgünlere laýyklykda işlenmeli we ýok edilmeli.
Içerki salgylanma geni adam RnaseP genidir.
Saklamak şertleri we möhleti
-20 ± 5 ℃, 6 aýlap dowam edýän 5 gezekden köp doňmakdan we eremekden gaça duruň.
Ulanylýan gural
FAM / HEX / CY5 we beýleki köp kanally floresan PCR gurallary bilen.
Talaplar
1.Gerekli nusga görnüşleri ： bokurdak çişleri, nazofargeal çişler, bronhoalveolar lavaage suwuklygy, tüýkürik。
2. Aýratyn ýygnamak (aseptiki usul）
Pharyngeal swab: Düwürtikleri we yzky faryngeal diwary bir wagtyň özünde iki süpürgiç bilen süpüriň, soňra süpürgiç kellesini nusga erginini öz içine alýan synag turbasyna çümdüriň.
Tüýkülik: Näsag çuňňur üsgülewükden soň, üsgülewük tüýkürigini nusga alma erginini öz içine alýan nurbat gapagyndaky turba ýygnaň;bronhoalveolar lavaage suwuklygy medical Lukmançylyk hünärmenleriniň nusgasy.3. Nusgalary saklamak we daşamak
Wirus izolýasiýasy we RNK barlagy üçin nusgalar mümkin boldugyça gysga wagtda barlanmalydyr.24 sagadyň dowamynda ýüze çykaryp boljak nusgalary 4 at saklap bolýar;24-de tapyp bolmaýanlary
sagatlar -70 ℃ ýa-da ondan aşakda saklanmalydyr (eger -70 storage saklama ýagdaýy ýok bolsa, olar bolmaly
wagtlaýyn -20 ℃ sowadyjyda saklanýar).Mysallar daşalýan mahaly doňmakdan we eremekden gaça durmalydyr.Nusgalar ýygnanandan soň gysga wagtda laboratoriýa iberilmelidir.Nusgalary uzak aralyklara daşamak zerur bolsa, gury buz saklamak maslahat berilýär.
Synag usullary
1 Nusga gaýtadan işlemek we RNK çykarmak (nusga gaýtadan işleýän ýer)
RNK çykarmak üçin 200μl suwuk nusga almak maslahat berilýär.Baglanyşyk bilen baglanyşykly ädimler üçin täjirçilik RNK çykarmak toplumlarynyň görkezmelerine serediň.Hem negatiw, hem negatiw
gazyp almak üçin bu toplumdaky dolandyryşlar gatnaşdy.
2 PCR reagent taýýarlygy (reagent taýýarlanylýan ýer)
2.1 Kitapdan ähli komponentleri aýyryň we erediň we otag temperaturasynda garmaly.Ulanylmazdan birnäçe sekundyň dowamynda 8000 aýlawda sentrifuga;zerur reagentleri hasaplaň we reaksiýa ulgamy aşakdaky tablisada görkezilişi ýaly taýýarlanýar:
| Komponentler | N hyzmat etmek (25µl ulgam) |
| nCOV primeri TaqMan synag | 18 µl × N. |
| RT-PCR reaksiýa çözgüdi | 2 µl × N. |
| * N = synag edilen nusgalaryň sany + 1 (otrisatel gözegçilik) + 1 (nCOVoňyn gözegçilik) | |
2.2 Komponentleri düýpli garyşdyranyňyzdan soň, turba diwaryndaky ähli suwuklygyň turbanyň düýbüne düşmegi üçin sentrifuga gysga wagtlap, soňra 20 µl güýçlendiriji ulgamyny PCR turbasyna bölüň.
3 Nusga almak (taýýarlyk nusgasy)
Çykarylandan soň otrisatel we polo positiveitel gözegçiliklerden 5μl goşuň.Synag ediljek nusganyň RNK PCR reaksiýa turbasyna goşulýar.
Güýçlendirijini kesgitleýän ýere geçirmezden ozal turbany berk we sentrifugany 8000 aýlawda birnäçe sekuntlap ýapyň.
4 PCR güýçlendirme (güýçlendirilen kesgitleme meýdany)
4.1 Reaksiýa turbasyny guralyň nusga öýjügine ýerleşdiriň we parametrleri aşakdaky ýaly düzüň:
| etap | Sikl sany | Temperatura(° C) | Wagt | ýygyndysahypa |
| Tersinetranskripsiýa | 1 | 42 | 10min | - |
| Denaturation | 1 | 95 | 1min | - |
| Sikl | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30s | maglumatlary ýygnamak |
Gurallary kesgitlemek kanalyny saýlamak: Floresan signaly üçin FAM 、 HEX 、 CY5 kanalyny saýlaň.Floresan NONE salgylanmak üçin ROX saýlamaň.
5 Netijeleriň derňewi (Sazlamak üçin her guralyň synag synaglaryna serediň)
Reaksiýadan soň netijeleri saklaň.Derňewden soň başlangyç bahasyny, gutarýan bahasyny we esasy bahasynyň şekiline görä sazlaň (ulanyjy hakyky ýagdaýa görä sazlap biler, başlangyç bahasy 3 ~ 15, ahyrky bahasy kesgitlenip bilner) 5 ~ 20, düzediş) logarifmiki grafada Penjiräniň bosagasynda bosaganyň çyzygy logarifmiki fazada, negatiw dolandyryşyň güýçlendirme egrisi göni çyzyk ýa-da bosaganyň aşagyndadyr).
6 Düşünjeli gözegçilik test Prosessual gözegçilik synaga girýär ative ativearamaz gözegçilik: FAM, HEX, CY5 kesgitleýiş kanallary üçin güýçlendirme egrisi ýok
COV polo positiveitel gözegçilik: FAM we HEX kesgitleýiş kanallarynyň aç-açan güýçlendirme egrisi, Ct bahasy ≤32, ýöne CY5 kanalynyň güýçlendirme egrisi ýok;
Aboveokardaky talaplar şol bir synagda bir wagtda ýerine ýetirilmelidir;bolmasa, synag nädogry we gaýtalanmaly.
7 Netijeleri kesgitlemek.
7.1 Synag nusgasynyň FAM we HEX kanallarynda güýçlendirme egrisi ýa-da Ct bahasy> 40 ýok bolsa we CY5 kanalynda güýçlendirme egrisi bar bolsa, 2019-njy ýylda täze koronawirusyň ýokdugyna (2019-nCoV) baha berip bolar. Mysal üçin RNK;
.2 Synag nusgasynda FAM we HEX kanallarynda aç-açan güýçlendirme egrileri bar bolsa we Ct bahasy ≤40 bolsa, nusganyň 2019-njy ýyldaky täze koronawirus (2019-nCoV) üçin oňyn bolandygyna baha berip bolar.
7.3 Synag nusgasynda diňe FAM ýa-da HEX kanalynda aýdyň güýçlendirme egrisi bar bolsa we Ct bahasy ≤40 bolsa, beýleki kanalda güýçlendirme egrisi ýok bolsa, netijeler yza çekilmeli.Retest netijeleri yzygiderli bolsa, nusga täze üçin oňyn diýip baha berip bolar
koronawirus 2019 (2019-nCoV).Iň soňky netije negatiw bolsa, nusganyň 2019-njy ýyldaky täze koronawirus (2019-nCoV) üçin negatiwdigine baha berip bolar.
Oňyn baha
ROC egrilik usuly toplumyň salgylanma CT bahasyny kesgitlemek üçin ulanylýar we içerki gözegçilik salgylanma bahasy 40.
Synag netijelerini düşündirmek
1. Her synag, otrisatel we oňyn gözegçilikler üçin synagdan geçirilmelidir.Synag netijeleri diňe gözegçilikler hil gözegçiliginiň talaplaryna laýyk gelende kesgitlenip bilner
2.FAM we HEX kesgitleýiş kanallary polo isitel bolanda, CY5 kanalynyň (içerki gözegçilik kanaly) ulgamy bäsdeşligi sebäpli negatiw bolup biler.
3. Içerki gözegçilik netijesi otrisatel bolsa, synag turbasynyň FAM we HEX kesgitleýiş kanallary hem otrisatel bolsa, bu ulgamyň ýapykdygyny ýa-da işleýşiniň nädogrydygyny, synagyň nädogrydygyny aňladýar.Şonuň üçin nusgalary saklamaly.
